splošnost
Imunofiksacija je laboratorijski test, ki omogoča identifikacijo in tipizacijo gama globulinov, prisotnih v biološkem vzorcu.
Podrobneje, analiza omogoča preučevanje - v bolnikovi krvi ali urinu - razrede imunoglobulina (IgA, IgG, IgM, IgE ali IgD) in vrste kapa ali lambda lahke verige glede na njihovo specifično elektroforetsko mobilnost. . Kasneje, za identifikacijo, kateri gama globulin je vpleten, imunofiksacija vključuje inokulacijo specifičnih antigenov za fragment ali ustrezno protitelo (antiimunoglobulinski antiserum ): prisotnost domnevne spremembe je potrjena s formacijo oborine, ki je vidna s prostim očesom ali mikroskopom.
Ta informacija je zelo pomembna za vzpostavitev, zlasti, diagnoze patologij plazemskih celic (gamopatija ali discrazija plazemskih celic). Imunofiksacija je zelo uporabna za ocenjevanje in spremljanje multiplega mieloma, Waldenströmove makroglobulinemije in primarne amiloidoze (imenovane tudi amiloidoza lahke verige).
Kaj
Imunofiksacija (ali imunoelektroforeza, tudi skrajšana v kratici IFE ) je tehnika, s katero se lahko ugotovi, ali je in kateri razred imunoglobulinov (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) ali vrsta lahke verige kapa ali lambda, prisoten v presežek ali okvara bolnikovega krvnega seruma in urina.
Kappa in lambda lahke verige označujeta monoklonsko komponento, tj. Protitelesa z enako identično kemijsko strukturo.
Serum in imunofiksacija urina: kdaj je navedena?
Plazmacelularne displazije ali gamopatije so heterogena skupina motenj neznane etiologije, za katere je značilno:
- Nesorazmerna proliferacija klonov B celic ;
- Prisotnost v serumu in / ali urinu vrste imunoglobulina (ali njegove polipeptidne podenote), strukturno in elektroforetsko homogena ( monoklonska ).
Običajno se diagnoze plazemskih celic diagnosticirajo z elektroforezo serumskih in urinskih proteinov, ki ji sledi imunofiksacija seruma (IFE).
Hkrati se lahko predpiše krvni test za merjenje skupne koncentracije imunoglobulinov (IgG + IgM + IgA).
Če želite izvedeti več: Imunoglobulini - kaj so, kako se merijo in referenčne vrednosti »Imunofiksacija: osnovno načelo
Imunofiksacija je pregled, ki vključuje dve fazi (najprej elektroforezo v agaroznem gelu, nato imunoprecipitacijo s specifičnimi antiserumi ).
Prvi korak imunofiksacije je enak kot pri ELEKTROPHORESI beljakovin (ali protidogramov), zato je treba zapomniti nekaj konceptov:
- Elektroforeza je laboratorijska analiza, ki omogoča določanje količine beljakovin, ki so prisotne v krvnem serumu ali drugih bioloških vzorcih in za vsako frakcijo razkriva, ali obstajajo kakšne anomalije glede kakovosti. Zlasti ta pregled omogoča ločevanje beljakovin na pet skupin: albumin, alfa 1 globulin, alfa 2 globulin, beta globulin in gama globulin ; slednji so natančneje raziskani z imunofiksacijo.
- Elektroforeza je ločilna metoda, ki temelji na različni hitrosti migracije električno nabitih delcev, skozi raztopino in inertni nosilni medij, pod vplivom električnega polja, ki ga generira enosmerni tok. V praksi preizkus izkorišča električni naboj in molekulsko maso beljakovin, ki so prisotne v pacientovem vzorcu. Pod impulzom električnega polja te makromolekule migrirajo in "grupirajo" po tipu in se na značilen način odzivajo na stres. Rezultat ( elektroforetsko sledenje ) je sestavljen iz različnih vrhov in krivulj, katerim ustrezajo proteinske frakcije. Običajno je prvi vrh, višji in ožji, albumin ; sledimo, da opazujemo vrhove globulina, veliko nižje od albumina. Povečanje ali zmanjšanje amplitude in intenzivnosti vrhov, ki se oblikujejo na poti, kažejo na večjo ali manjšo prisotnost beljakovin v vsaki kategoriji; več je beljakovin v pasu, višji je ustrezni vrh. V primeru gama globulinov, če želimo vedeti količino vsakega od različnih razredov (IgA, IgM, IgG itd.), Bo treba uporabiti enkratni odmerek. Na splošno je več gama globulinov prisotnih v pasu, višji je ustrezni vrh; višina ustreza skupni količini beljakovin, ki spadajo v določeno kategorijo.
IMUNOFISSATION določa:
1) Elektroforeza z agaroznim gelom: pacientov vzorec (serum ali urin) se odlaga na elektroforetski trak, tj. Podporo za migracijo (ponavadi, agarozni gel). Z uporabo električnega polja, ki ga generira enosmerni tok, se doseže ločevanje v različnih pasovih. V praksi se vsak tip gama globulina, ki je prisoten v zmesi (tj. V vzorcu bolnika), seli na podlagi molekulske mase in električnega naboja. Različna elektroforetska mobilnost gama globulinov omogoča njihovo identifikacijo (vsaka od njih sovpada s specifičnim pasom v elektroforetski poti) in opazuje kakršne koli nepravilnosti.
2) Imunoprecipitacija s specifičnimi antiserumi (fiksacija) : specifični antigeni za specifično protitelo ali fragment so dodani posamezno v vsak elektroforetski trak (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa ali anti-chain) lambda lahka veriga). Če je prisoten monoklonski protein, bo medsebojno delovanje antigena z ustreznim protitelesom povzročilo ozek pas (to pomeni, da je rezultat pozitiven) in nastanek oborine, ki je vidna s prostim očesom ali mikroskopom. Nazadnje se vzorec obdela (tj. Izpere in obarva), da se odstranijo beljakovine, ki se niso oborile, da se doseže sušenje gela in nadaljuje z branjem rezultatov.
Zakaj teče
Za kaj je imunofiksacija?
Imunofiksacija seruma je preiskava za diagnosticiranje ali spremljanje bolezni, za katere je značilna sprememba gama globulinov, zlasti kadar gre za proizvodnjo monoklonske komponente ( monoklonska gamopatija ).
Če želite izvedeti več: Monoklonske gamopatije - kaj in katere so »Imunofiksacija je uporabna v primerih suma plazma celične diskrazije in je bistvena za študijo MIELOMA (in sorodnih patologij) in MGUS (kratica za "monoklonske gamopatije z negotovim pomenom").
Ta test nam omogoča tudi oceno Waldenströmove makroglobulinemije in lahke verige amiloidoze ( AL ).
Imunofiksacija: kdaj je predpisan pregled?
Indikacija za imunofiksacijo je posledica kliničnih ali laboratorijskih dokazov, ki vzbujajo sum na spremembe monoklonskih protiteles ali imunoglobulinov v serumu ali urinu.
Na primer, ta pregled omogoča poglobitev rezultata serološke elektroforeze ali serološke elektroforeze: ko v elektroforetskem sledenju pasovi, ki ustrezajo gama globulinom, odstopajo od normalnosti, imunofiksacija opredeljuje, katera od teh beljakovin je spremenjena glede na količino in kakovosti.
Skratka, serumsko imunofiksacijo je mogoče predpisati:
- V primeru, da drugi laboratorijski testi zagotavljajo nenormalni rezultat, v smislu odsotnosti ali manjše in večje količine beljakovin v plazmi glede na normo;
- Kadar se sumi na prisotnost bolezni, za katere je značilna proizvodnja monoklonske komponente, kot so: \ t
- Multipli mielom in njegove različice;
- Waldenströmova makroglobulinemija;
- amiloidoza;
- Ko se pri bolniku pojavijo simptomi in znaki, ki kažejo na prisotnost monoklonske gamopatije ali multiplega mieloma, kot so: \ t
- Bolečine v kosteh;
- anemija;
- Enostavna utrujenost;
- Ponavljajoče se okužbe;
- Nepojasnjeni zlomi.
V primeru multiplega mieloma je elektroforeza proteinov in imunofiksacija zelo koristna tudi za spremljanje napredovanja bolezni (spremljanje).
Immunofixation: na katerih vzorcih se lahko izvede?
Biološki vzorci, ki so lahko podvrženi imunofiksaciji, so predvsem:
- Serum (imunofiksacija seruma);
- Urin (imunofiksacija urina);
- Tekočina * (imunofiksacija tekočine).
* Opomba : CSF ali cerebrospinalna tekočina je tekočina, ki prežema in ščiti možgane, hrbtenjačo, kranialne živce in hrbtenične korenine.
Normalne vrednosti
NEGATIVNI rezultat serumske in urinske imunofiksacije za monoklonske ali poliklonalne gama globuline velja za NORMALNO .
Gama globulini
Gamma globulini tvorijo 9-20% vseh plazemskih beljakovin.
- Referenčna vrednost Gamma globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Glede na skupno koncentracijo imunoglobulinov ( IgG + IgM + IgA ) velja, da so vrednosti med 600 in 2300 mg / dl normalne.
- Referenčna vrednost Imunogobulini v serumu : \ t
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Opomba : Referenčni interval izpita se lahko nekoliko razlikuje glede na starost, spol in instrumente, ki se uporabljajo v laboratoriju za analizo. Iz tega razloga se je bolje posvetovati z razponi, ki so navedeni neposredno v poročilu. Ne smemo pozabiti, da mora rezultate analiz v celoti oceniti splošni zdravnik, ki pozna bolnikovo zdravstveno anamnezo.
Visoke vrednosti - vzroki
Povečanje gama globulinov je lahko:
- Poliklonsko, če je proizvodnja imunoglobulinov heterogena, to pomeni, da so vse komponente gama globulinov, ki so proizvedene ali izhajajo iz različnih plazemskih celic, prizadete zaradi povečanja;
- Monoklonsko, kadar so gama globulini proizvedeni ali pridobljeni iz enega samega tipa (klon) plazemskih celic.
Povečanje poliklonskih gama globulinov je lahko povezano z: \ t
- Kronične vnetne bolezni;
- Revmatoidni artritis;
- Sistemski eritematozni lupus;
- Kronične bolezni jeter (kot so hepatitis in ciroza);
- Akutne in kronične okužbe;
- Nedavne imunizacije;
- Nekatere tumorske bolezni.
Visoke vrednosti monoklonskih gama globulinov lahko namesto tega nakazujejo prisotnost:
- Nekatere novotvorbe in kronična vnetja;
- Multipli mielom;
- limfom;
- Waldenströmova makroglobulinemija.
Presežek gama globulina se imenuje hipergamaglobulinemija, pomanjkljivost pa je znana kot hipogamaglobulinemija .
Nizke vrednosti - vzroki
Zmanjšanje gama globulinov lahko kaže na genetsko prisotnost različnih bolezni imunskega sistema, vključno z agamaglobulinemijo ali sekundarno imunsko pomanjkljivostjo (npr. AIDS, ledvična odpoved, akutna sepsa in Cushingov sindrom).
Zmanjšanje vrednosti gama globulina je lahko odvisno tudi od uporabe citostatičnih zdravil, imunosupresivov in steroidov.
Kako se izvaja
Imunofiksacija seruma
Imunofiksacija seruma vključuje preprosto odvzem krvi iz vene roke. Serum dobimo s centrifugiranjem biološkega vzorca; to dejansko omogoča, da se frakcija, ki vsebuje celice (korpuskularni del), loči od tekočine krvi (plazme). V krvnem serumu ni koagulacijskih dejavnikov (fibrinogen, faktor VIII, faktor V in protrombin).
Imunofiksacija urina
Za izvajanje urinske imunofiksacije je potrebno zbrati majhno količino urina v posebno sterilno posodo. Na podlagi indikacij zdravnika in laboratorija lahko vzorec zberemo brez natančnega časa ( naključno ) ali v 24 urah .
Imunofiksacija tekočine
Analiza zahteva jemanje majhne količine cerebrospinalne tekočine z vstavitvijo igle v spinalno votlino ( lumbalna punkcija ).
priprava
Imunofiksacija: kako se pripravite na izpit?
- Pred odvzemom krvi lahko nekateri laboratoriji zahtevajo, da opazujete post vsaj 10-12 ur. V tem času je dovoljena majhna količina vode.
- Imunofiksiranje se lahko izvede na urinu, odvzetem ob določenem času dneva (naključno) ali v 24 urah, zato je potrebno predhodno dobiti ustrezne sterilne posode.
- Pri imunofiksaciji tekočine namesto tega ni potreben poseben pripravek.
Kaj lahko spremeni izid izpita?
Nekatera zdravila lahko vplivajo na izid imunofiksacije, zato je priporocljivo, da o vseh terapijah, ki potekajo, priporoca zdravniku.
V šestih mesecih pred pregledom lahko cepiva (imunizacija) in uporaba zdravil, kot sta fenitoin, prokainamid, peroralni kontraceptivi, metadon in terapevtski gama globulin, povečajo koncentracijo imunoglobulinov. Druga zdravila, ki lahko spremenijo rezultat testa, so kortikosteroidi, neomicin, acetilsalicilna kislina in klorpromazin.
Interpretacija rezultatov
Rezultat imunofiksacije se oceni v kombinaciji z rezultati drugih analiz. Za razlago ugotovitve je odgovoren splošni zdravnik ali referenčni zdravnik, ki lahko identificira in primerja spremembe, ki vplivajo na določen gama globulin (na primer pas, ki sovpada z imunoglobulini G), na določene bolezni. Ta ocena potrjuje ali podpira diagnostično hipotezo: na splošno lahko imunofiksacija razkrije normalen profil gama globulina ali identificira monoklonski protein ali poliklonski model .
Ko je bolezen definirana, se lahko izvede imunofiksacija za:
- Spremljajte bolezen skozi čas, nato sledite njenemu poteku (spremljanje);
- Preverite učinkovitost terapevtskega protokola .
Prednosti in slabosti imunofiksacije
V primerjavi z beljakovinsko elektroforezo, imunofiksacija:
- Je hitrejši : rezultati imunizacije se običajno dobijo v treh urah;
- Je bolj občutljiva (čeprav rahlo): imunofiksacija lahko razkrije imunoglobulin, izključen iz elektroforeze v beljakovinah, zlasti pri nizkih koncentracijah (manj kot 1 gram / liter).
Poleg tega imunofiksacija:
- Lahko se delno avtomatizira ;
- Je lahko berljiva in razlagljiva .
Vendar je imunofiksacija dražja od elektroforeze v beljakovinah in omogoča le analizo gama globulina .
Normalni rezultat
Pri imunofiksaciji normalna pot vključuje:
- Pas, ki sovpada s temnejšim imunoglobulinom G ( IgG );
- Pas, ki ustreza najslabšemu imunoglobulinu A ( IgA );
- Odsotnost pasu za imunoglobulin M ( IgM );
- Kappa trak je gostejši od lambda (lahke verige), v razmerju 2: 1.
V normalnem rezultatu so trakovi veliki in obstaja postopno in enakomerno zmanjšanje barvne gostote proti robom traku imunoelektroforeze.
Poliklonalni gama globulini
V nekaterih primerih so vsi imunofiksacijski trakovi enakomerno zasenčeni. Ta model predstavlja prisotnost poliklonskih imunoglobulinov . Tudi v tem primeru so pasovi široki in prehod na robove imunoelektroforetičnega traku je postopen. Pas IgM - običajno odsoten - je širok.
Monoklonski gama globini
Kadar se na poti imunofiksacije prepozna ozek pas z ostrimi robovi, to pomeni, da je iskanje monoklonskih komponent pozitivno .
Identifikacija monoklonskega imunoglobulina je uporabna pri diagnosticiranju naslednjih stanj:
- Monoklonska gamopatija neznanega pomena (MGUS);
- Multipli mielom;
- Waldenstromova makroglobulinemija;
- Amiloidoza.
Poleg tega se lahko imunofiksacija uporablja za spremljanje zdravljenja disskrasije plazemskih celic (tj. Multipli mielom in Waldenstromova makroglobulinemija). Če se raven monoklonskih beljakovin po kemoterapiji zmanjša ali se ne zazna, lahko kaže na odziv na zdravljenje . V nasprotju s tem je monoklonski protein, ki vztraja kljub zdravljenju, znak refraktorne bolezni .
Prosimo, upoštevajte . Negativni rezultat imunofiksacije ne izključuje vedno disskrasije plazemskih celic. Na primer, ne-sekrecijski multipli mielom ali oligosekretija lahko da negativne rezultate tako v urinu kot v serumu. Če je diagnostični sum na gamopatijo še vedno visok, se določi razmerje med Kappa / Lambda libernimi lahkimi verigami ( razmerje K / L ).
Imunofiksacija in diagnoza multiple skleroze
Imunofiksacija cerebrospinalne tekočine (likerja) je predpisana, ko zdravnik sumi na prisotnost multiple skleroze . V tem primeru je značilna pot, ki je določena, saj poudarja prisotnost tako imenovanih oligoklonskih pasov . Rezultati so v poročilu laboratorija navedeni kot pozitivni . Upoštevati je treba, da se pasovi običajno ne opazijo v serumski imunofiksaciji, saj so povezani s proizvodnjo intratekalnih gama globulinov .
Vendar pa je treba opozoriti, da ta ugotovitev ne potrjuje nujno diagnoze, saj se lahko pojavijo tudi druga stanja z oligoklonalnimi pasovi v cerebrospinalni tekočini.
Z drugimi besedami, identifikacija oligoklonskih pasov z imunofiksacijo likerja je zelo koristna za podporo diagnozi multiple skleroze, vendar jo je treba potrditi z drugimi raziskavami . Drugi pogoji, ki lahko zagotovijo ta rezultat, so vnetja centralnega živčnega sistema, vključno z: encefalitisom, ki je povezan z virusom HIV, nevrosifilisom, nevrosarkoidozo, lymskim meningoencefalitisom, malignim obolenjem osrednjega živčevja, optičnim neuromijelitisom in transverzalnim mielitom.
