Test

Test za merjenje moči antioksidantov

Esej ABTS

To je analitična metoda, ki uporablja spektrofotometrične meritve za določanje antioksidativne zmogljivosti vzorca. Z UV-Vis spektrofotometrom merimo absorbanco raztopine, ki vsebuje radikal ABTS • +, ki nastane z oksidacijo ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonat), brezbarvna snov v obliki Radikali so obarvani z absorpcijo na valovnih dolžinah v vidnem območju. Raztopini ABTS • + antioksidantnih molekul, ki lahko delujejo s prenosom tako vodika kot elektrona, določimo redukcijo radikala v brezbarvno obliko, To beljenje, sorazmerno s količino prisotnega antioksidanta, se lahko izmeri kot zmanjšanje absorbance skozi določen čas pri določeni valovni dolžini (734 nm). Antioksidacijska moč se izrazi v primerjavi s vrednosti absorbance, izmerjene za znane količine molekule antioksidanta, izbrane kot referenčni standard, ki je ponavadi askorbinska kislina ali Trolox (v tem primeru \ t govorimo o antioksidantni aktivnosti TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.

Prednost merjenja antioksidacijske moči, ki temelji na uporabi ABTS, je, da je enostavna in hitra. Poleg tega omogoča merjenje antioksidativnih snovi, tako hidrofilnih kot lipofilnih, v širokem pH območju. Vendar pa je treba upoštevati, da uporabljeni radikal (ABTS • +) ni fiziološki in ni prisoten v bioloških sistemih in da so pogosto izpostavljene težave ponovljivosti meritev zaradi kinetike reakcij različnih vključenih antioksidantov.

FRAP (zmanjšanje antioksidativne moči železa)

Test FRAP meri sposobnost redukcije antioksidantov na ione železa. Gre za metodo, ki temelji na prenosu elektronov, v kateri ioni železa prehajajo iz Fe3 + v Fe2 +. Pod določenimi pogoji pH (3.6) in v prisotnosti TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazina) ti ioni tvorijo komplekse z različnimi značilnostmi, zlasti z reduciranim derivatom (Fe2 +). -TPTZ) prevzame modro barvo, ki ima maksimalno absorpcijo pri 593 nm, ki jo je mogoče meriti spektrofotometrično. Zmogljivost redukcije antioksidantne snovi je zato mogoče izmeriti kot spremembo absorbance raztopine, ki vsebuje oksidant, pri valovni dolžini, določeni s primerjavo s spremembo glede na standard (npr. Askorbinska kislina).

Test FRAP je bil zasnovan za merjenje redukcijske moči plazme, vendar je bil nato prilagojen za testiranje antioksidacijske sposobnosti čistih spojin in kompleksnih matrik. Dejstvo je, da ta metoda omogoča vrednotenje le redukcijske zmogljivosti s prenosom elektronov, ki popolnoma ignorira delovanje antioksidantov, ki delujejo s prenosom vodika, vendar ne omogoča merjenja prispevka molekul, kot so tioli in beljakovine, ki igrajo antioksidativno vlogo. v bioloških tekočinah (npr. v krvi). Prednost pri uporabi te metode je, da je to ena najpreprostejših, najhitrejših in najcenejših metod za določanje antioksidantske zmogljivosti in vitro.

PRESKUS DPPH

2, 2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH •) je zelo stabilen in komercialno dostopen dušikov radikal, za katerega je značilna intenzivna vijolično-rdeča barva, ki se zmanjša v prisotnosti molekule z antioksidacijsko sposobnostjo. S spektrofotometričnim merjenjem pri 517 nm spremembe absorpcije raztopine DPPH po reakciji z antioksidacijsko spojino je mogoče količinsko opredeliti redukcijsko zmogljivost preskusne snovi, ali deluje s prenosom vodika ali prenosom elektronov. Rezultat je na splošno izražen kot IC50, tj. Količina antioksidanta, ki je sposoben zmanjšati začetno koncentracijo DPPH za 50%.

To je hitra, enostavna in poceni metoda. Meje te analitične tehnike so podane z možnostjo, da so rezultati analize izkrivljeni v primeru, ko se molekule, ki se pregledujejo, absorbirajo v istem območju valovne dolžine radikala DPPH ali v prisotnosti velikih molekul, ki so sterilno stisnjene in ne reagirajo z reaktivnim delom radikala. To povzroči, da DPPH reagira z antioksidanti do 1000-krat počasneje kot peroksilni radikali.

PCL TEST (fotokemiluminescenca)

Test PCL temelji na reakciji vrste radikala, superoksidnega aniona (O2 • -), ki ga fotokemično generira UV sevanje, s spojino, ki lahko oddaja kemiluminescenco. Uporabljeni marker je luminol, molekula, ki pri oksidaciji s prostimi radikali oddaja svetlobo, ki jo lahko izmerimo s posebnim instrumentom (Photochem®). Prisotnost antioksidativnih snovi v mešanici obrokov deaktivira vrste radikalov, ki zavirajo emisijo kemiluminescence. PCL analiza je zelo hitra in občutljiva. Poleg tega se lahko z uporabo dveh različnih analitičnih protokolov, imenovanih ACW (Antioksidacijska kapaciteta vodotopna) in ACL (topnost v antioksidantski zmogljivosti lipidov), za isto spojino izmeri prispevek k skupni antioksidacijski sposobnosti vodotopne komponente (flavonoidi, vitamin E). C, aminokisline itd.) Kot liposolubilne (tokoferoli, tokotrienoli, karotenoidi itd.). Antioksidacijsko zmogljivost izdelka, ki se pregleduje, dobimo s primerjavo vrednosti, zabeleženih z meritvami, ki se nanašajo na standardne referenčne molekule, askorbinsko kislino za protokol ACL in Trolox za protokol ACW.